原理：

在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)位于细胞膜内侧，一旦发生细胞凋亡，可以从细胞膜的内侧迅速翻转到细胞膜的外侧，使得PS暴露在细胞膜表面。Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36kD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白。在Ca2+ 存在的情况下，AnnexinⅤ与PS有很高的亲和力，可与之迅速特异性结合。以标记了FITC的AnnexinⅤ作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。

Propidium iodide(PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。将Annexin Ⅴ与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。

试剂盒组成（50/25次反应）：

Annexin V-FITC 500 uL / 250 uL

Binding Buffer 40 mL / 20 mL

Propidium Iodide (PI) 250 uL / 125 uL

使用步骤：

1. 调整待测细胞的浓度为5×10⁵-1×10⁶个/ mL；

2. 取1 mL细胞，1000 rpm，4 ℃离心10分钟，弃上清；

3. 加入事先预冷的PBS或无血清培养液，轻轻震荡使细胞悬浮，1000 rpm，4 ℃离心10分钟，弃上清；

4. 重复步骤3两次(对于贴壁细胞，先用胰酶消化，再用PBS洗涤)；

5. 将Annexin V-FITC用Binding Buffer以1:400稀释后，放置冰上备用；

6. 将细胞重悬于200 uL含Annexin V-FITC的Binding Buffer中。

7. 避光室温反应10分钟，上机前加入5 uL PI，在1小时内上机检测；

8. 若用荧光显微镜检测，将细胞混合液离心，取细胞沉淀涂片，再进行观察。

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